Utilidad de la prueba de micronúcleos y anormalidades nucleares en células exfoliadas de mucosa oral en la evaluación de daño genotóxico y citotóxico / Utility micronucleus test and nuclear abnormalities in exfoliated cells of oral mucosa in the evaluation of genotoxic and cytotoxic damage

Los micronúcleos son fragmentos o cromosomas completos que quedan fuera del núcleo durante la mitosis; mediante su estudio se pueden evaluar los efectos de genotóxicos ambientales y ocupacionales. Esta prueba es ampliamente utilizada y es una alternativa eficaz, sencilla y económica para detectar la perdida de material genético. Por otra parte, la cavidad oral puede reflejar el estado de salud de los individuos, debido a que la mucosa que la recubre, puede presentar evidencias a nivel microscópico como macroscópico de cambios indicativos de enfermedad local sistémica o por exposición a sustancias tóxicas así como efectos secundarios por tratamientos. Dichas ventajas, favorecen su utilización en pruebas para evaluar genotóxicos o citotóxicos. La mucosa es una barrera protectora del resto del organismo, es un punto de contacto de agentes potencialmente peligrosos; por tanto, se torna susceptible de sufrir daños. El epitelio de revestimiento oral (60 por ciento) es estratificado no queratinizado formado por células con abundante citoplasma, permite la penetración de colorantes y facilita la observación e identificación de características morfológicas del núcleo y membrana celular. Además la mucosa tiene elevada capacidad proliferativa y aunque esta particularidad mantiene la población celular constante, por otro lado, se vuelve más vulnerable a daño al ADN. Esto cobra relevancia ya que el 90 por ciento del cáncer tienen origen epitelial, así que la mucosa oral es usada para monitorear eventos genotóxicos tempranos causados por cancerígenos inhalados o ingeridos. Este epitelio es de fácil acceso, poco invasivo, por lo que al tomar la muestra a los individuos, se les genera mínimo estrés. Por todo lo anterior, el epitelio oral es un tejido ideal para aplicar la técnica de micronúcleos y detección de anormalidades nucleares sin necesidad de cultivos celulares, lo que representa una oportunidad para realizar estudios epidemiológicos en poblaciones de alto riesgo.

Micronucleus are fragments or whole chromosomes that are outside the nucleus during mitosis. Through this study we can evaluate the environmental and occupational the genotoxic effects. This test is widely used because it is a very effective alternative, it is a simple, fast and inexpensive way to detect the loss of genetic material. Meanwhile a healthy oral cavity is evidenced because in the overlying mucosa changes indicative of local or systemic disease, toxic exposure and side effects of treatments can be observed. This favors their use in tests to assess the presence of genotoxins or cytotoxins. Although protective barrier from the rest of the body is the point of contact of potentially dangerous agents thus becoming susceptible to damage. Coating and oral epithelium (60 percent) are formed by stratified non-keratinized cells with abundant cytoplasm, allowing the absorption of dyes and facilitating microscopic observation and identification of nucleus and membrane morphological characteristics. It has a particularly proliferative capacity, and even though this particularity maintains constant cell population, on the other hand, becomes more vulnerable to DNA damage. This information is relevant as 90 percent of all cancers are of epithelial origin. Therefore, the oral mucosa is used to monitor early events caused by inhaled or ingested genotoxic carcinogens. Epithelium is easily accessible and minimally invasive, thereby generating less stress when samples are obtained from study participants. In view of the above, oral epithelium tissue is ideal for implementing micronucleus assay and for the detection of nuclear abnormalities without the need for cell cultures, which presents a unique opportunity for epidemiological studies in high-risk populations.

Evaluation of genotoxic activity of maleic hydrazide, ethyl methane sulfonate, and N-nitroso diethylamine in Tradescantia

Objetivo. Evaluar la genotoxicidad de N-nitroso dietilamina (NDEA), hidrazida málica (MH) y etil metano sulfonato (EMS), en núcleos de Tradescantia (clona 4430) por medio de la prueba del cometa y de la prueba de mutación rosa, en los pelos estaminales de la misma planta. Material y métodos. Las plantas de Tradescantia (clon 4430) fueron obtenidas del Laboratorio de Citogenética y Mutagénesis del Centro de ciencias de la Atmósfera de la Universidad Nacional Autónoma de México, tratadas con NDEA a 1, 5, 10 mM, MH a 1, 5, 10 mM y EMS a 15, 30 y 45 mM, y utilizadas en la prueba de mutación rosa y en la del cometa, en núcleos celulares de los pelos estaminales. En la primera, la lectura de los pelos estaminales se realizó de acuerdo con el método de Underbrink. En otros estudios, que han aplicado la prueba del cometa en plantas, existe la necesidad de romper la pared celular y separar los núcleos por gradiente de centrifugación; en este caso, los núcleos de las células de los pelos estaminales fueron extraídos por aplastamiento sin aplicar un procedimiento especial para romper la pared, colectados por filtración en una malla de nylon y sometidos a la prueba del cometa. La prueba t de Student se usó para analizar los datos obtenidos. Resultados. Ambas pruebas presentaron una gran sensibilidad a los mutágenos estudiados y hubo una relación evidente dosis-eventos rosa / longitud de la cauda. Aunque la prueba de mutación rosa en Tradescantia fue muy sensible a MH y EMS, no se detectaron dosis bajas de NDEA; en cambio, la prueba del cometa en la misma planta permite detectar fácilmente la actividad de todos los agentes estudiados. Conclusión. La prueba del cometa en los núcleos de las células de los pelos estaminales de Tradescantia es una útil herramienta para los estudios de monitoreo. Además, es simple, sensible y más rápida que la prueba de mutación rosa en la misma planta. El texto completo en inglés de este artículo también está disponible en: http://www.insp.mx/salud/index.htm

Evaluación de la genotoxicidad de ciclofosfamida mediante prueba de micronúcleos en pacientes con lupus eritematoso sistémico / Assessment by micronuclei assay of genotoxicity by cyclophosphamide in systemic lupus erythematosus patients

Los pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) tienen un mayor riesgo para desarrollar cáncer. La ciclofosfamida (CFA) representa también un riesgo para desarrollar cáncer a largo plazo. Este medicamento se utiliza en pacientes con LES. La prueba de micronúcleos (MN) se ha utilizado para valorar genotoxicidad. No se ha estudiado si el uso de este fármaco en pacientes con LES induce MN.Objetivos: Evaluar si los pacientes con LES tratados con ciclofosfamida (CFA) tienen más micronúcleos que los controles sanos. Pacientes y Métodos: Se estudiaron pacientes con LES que estuvieran manejados con bolos mensuales de CFA. Los pacientes fueron evaluados por un cuestionario estructurado para variables demográficas y clínicas. Se determinaron MN en 4 ocasiones diferentes mediante raspado de mucosa oral; la primera toma fue inmediatamente antes del bolo, la segunda a los 14 días, la tercera inmediatamente antes del siguiente bolo y la última 14 días después. Cuarenta y tres voluntarios sanos sirvieron como controles. Un técnico cegado a datos demográficos de los pacientes cuantificó los MN. Resultados: Se incluyeron 10 pacientes; todos fueron mujeres; el promedio de edad fue de 38 ñ 8 años y el de la duración de la enfermedad de 9 ñ 5 años. El promedio de SLEDAI-MEX al inicio del estudio fue de 7.1 ñ 3.5. Se hicieron 34 determinaciones de MN en 10 pacientes (7 pacientes con 4 determinaciones, 3 pacientes con 2 determinaciones). El promedio global de MN en las pacientes con LES fue de 3.6 ñ 1.3 y de los controles de 1.3 ñ 1.3 (p=0.001). El número de MN fue mayor a los 14 días en comparación con las determinaciones antes de la administración del bolo. Conclusión: El número de MN en pacientes con LES tratados con CFA es mayor que en controles sanos, lo que refleja daño citogenético. Los resultados sugieren que el incremento de MN es mayor 14 días después de la exposición a la CFA. Serán necesarios estudios con mayor número de pacientes y seguimiento a largo plazo para determinar el riesgo que representan los MN para el desarrollo de cáncer.

Eritrocitos micronucleados en niños esplenectomizados con y sin quimioterapia / Micronucleated erytrocytes in splenectomized children with or without antineoplastic chemotherapy

Introducción. En el ser humano el bazo elimina de la circulación eritrocitos micronucleados (EMN) entre otras anormalidades; después de la esplenectomía, estos se evidencia, y al recibir quimioterapia antineoplásica (QA) se incrementa. El objetivo de este trabajo fue comparar el número de EMN en sangre periférica de niños esplenectomizados con y sin QA. Material y métodos. Se colectaron 56 muestras de 42 pacientes del Departamento de Hematología de Pediatria del Centro Médico Nacional de Occidente del Instituto Mexicano del Seguro Social, las cuales fueron divididas en 4 grupos (grupo 1: paciente con bazo y sin QA, grupo 2: paciente con bazo y con QA; grupo 3: pacientes esplenectomizados y sin QA; y grupo 4: pacientes esplenectomizados y con QA). Se realizaron frotis de sangre periférica; se tiñeron (tinción de Wright y Giemsa) y contaron al microscopio los EMN en 10,000 eritrocitos totales. Resultados. Se observó diferencia entre esplenectomizados vs no esplenectomizados (P<0.001); no así en el grupo no esplenectomizado con y sin QA. Al compara el grupo esplenectomizado sin QA vs con QA, se encontró diferencia significativa (P< 0.001). El número de EMN en niños resultó más bajo (P< 0.001) al compararlos con datos previos de adultos. Conclusión. Estos resultados revelan que el niño esplenectomizado es un bioindicador de agentes genotóxicos